媒介：MET基因异常长短小细胞肺癌中一种少见的驱动基因异常，但具有重要的临床治疗代价。非小细胞肺癌中MET基因异常主要有MET14跳突、MET基因扩增和MET卵白过表达，需要回收差异的检测要领。本文重点先容了非小细胞肺癌中MET基因异常的常见形式及其检测要领，而且对这些检测要领的优缺点也举办了相应的先容。

MET基因检测的平台和要领

　　MET基因异常长短小细胞肺癌（NSCLC）中很是重要的少见驱动基因形式，已经得到了极大的存眷和研究。MET基因异常主要包罗MET第14号外显子跳读突变（MET 14跳突）、MET基因扩增、MET基因点突变、MET基因融合及MET卵白过表达等。个中针对携带MET 14跳突的局部晚期或转移性NSCLC的MET抑制剂具有较好疗效，已于2021年在海内获批上市；其次MET基因扩增是EGFR?TKI靶向治疗重要的耐药机制之一， MET基因扩增的晚期 NSCLC患者可从MET抑制剂治疗中获益；别的关于MET卵白过表达的多项临床试验也正在举办傍边。

　　精确检测MET异常是利用MET抑制剂治疗的前提，在NSCLC中MET异经常见的分子病理检测要领主要包罗免疫组织化学、FISH、RT?qPCR、Sanger测序、二代测序技能等。然而，由于MET基因的异常的范例和方法较多，差异的检测要领有各自的优缺点，临床检测中面对着较多的问题和挑战。克日，《非小细胞肺癌MET临床检测中国专家共鸣》对MET常见的基因改变及其检测要领举办了具体的梳理，并形成共鸣。

 

（一）MET 14跳突可利用RT-qPCR、DNA二代测序或RNA二代测序举办检测，差异检测要领各有其优缺点，须要时可彼此验证或增补检测。MET 14跳突位点形式多样，临床检测和判读中需出格留意。

 

 

　　MET 14跳突的检测要领主要包罗Sanger测序、RT-qPCR、二代测序等，个中Sanger测序的检测通量和敏捷度较低，今朝在临床中应用较少。

　　RT-qPCR是在MET第13和第15号外显子区域设计引物，检测是否有特异性的扩增产品。该要领检测MET 14跳突精确率高，但对付一些与MET 14跳突成果相似的、非凡且稀有的MET变异形式（如Y1003位点氨基酸改变或缺失）会导致漏检。对付检测功效在阳性阈值四周的患者，其功效表明需审慎，应团结样本质量、肿瘤细胞含量以及检测质控环境综合阐明，须要时可利用其他平台举办复测。

　　DNA二代测序优选肿瘤组织样本或细胞学样本举办检测，今朝主要基于扩增子法和杂交捕捉法2种建库要领来富集并举办基因检测。思量到MET 14跳突的变异位点和形式多样性，差异建库要领的检测本领也有必然不同，推荐建库的靶向序列至少应包围全部MET 13内含子、MET 14外显子以及MET 14外显子下游50 bp的范畴（MET 14内含子内）。二代测序生物信息阐明的数据库应尽大概包括全面的MET 14跳突位点信息，并按期更新，对付检测到的疑似MET 14跳突，发起辅以RT-qPCR或RNA测序验证。

　　RNA二代测序是在RNA程度上检测MET第13/15号外显子融合来判定是否产生MET 14跳突。该要领直接检测MET 14跳突，检测包围范畴明晰，生物信息阐明简朴。但与RT-qPCR一样，对付一些稀有的MET变异形式大概会呈现漏检。RNA二代测序对样本质量要求高，检测全程需做好质控。

 

（二）MET基因扩增可回收FISH和二代测序举办检测，FISH是检测MET基因扩增的金尺度，二代测序检测MET基因扩增尚需进一步优化和验证。

 

 

　　MET基因扩增的检测要领主要包罗FISH、二代测序等，个中FISH今朝是检测MET基因扩增的金尺度。FISH通过荧光探针原位标志MET基因，可以团结形态直接调查肿瘤细胞中MET荧光信号的数量，来计较肿瘤细胞中MET基因拷贝数（GCN）；可能通过标志MET基因和第7号染色体着丝粒（CEP7），计较肿瘤细胞中MET/CEP7比值。该要领通过计较MET GCN及MET/CEP7比值来判定扩增环境，而且可区分局部扩增和多倍体。FISH检测MET基因扩增的判读尚无统一的尺度，今朝主要参考UCCC尺度和Cappuzzo尺度，推荐将MET GCN≥5或MET/CEP7≥2作为判读参考阈值。当MET/CEP7≥2时，判定为局部扩增；当MET GCN≥5且MET/CEP7＜2时，判定为多体。

　　DNA二代测序要领可以基于测序深度和特定位点变异频率等信息对检测MET基因拷贝数变异举办计较，首选肿瘤组织样本或细胞学样本。差异公司或尝试室利用的二代测序检测panel和生物信息阐明计策大概有所差异，检测功效的泛起形式也大概差异。有报道组织二代测序与FISH检测MET基因扩增的阳性一致性约为48%~62.5%，个中MET局部扩增阳性一致性为88%，而多倍体阳性的一致性仅为4%。因此，二代测序检测MET基因扩增有待进一步优化和验证，发起临床选用经NMPA核准或经充实验证的二代测序产物对MET基因扩增举办检测。

　　别的，微滴式数字PCR在MET基因扩增检测尤其血液标本的检测规模已有相关摸索，但该要领在临床应用前尚需进一步优化和验证。

 

（三）MET卵白过表达的检测要领主要为免疫组织化学的要领。